Kvalitativno določanje beljakovin v urinu. Metode za določanje beljakovin v urinu Slabosti Hellerjevega testa

Načelo metode: temelji na reakciji termoprecipitacije

Steklenina, oprema in reagenti:

Reagent: 2M acetatni pufer pH 4,9.

Filtriran urin;

Vodna kopel.

Napredek študije:

4 ml filtriranega urina zmešamo z 1 ml pufrske raztopine in segrevamo 15 minut v vodni kopeli pri temperaturi 56 °C.

Interpretacija dobljenih rezultatov:

Če je v urinu prisoten protein Bence Jones, se v prvih 2 minutah pojavi izrazit sediment.

Opomba:

Ko je koncentracija beljakovin manjša od 3Test g/l je lahko negativen, kar je precej redko, saj je običajno koncentracija beljakovin Bence Jones v urinu zelo pomembna.

Najbolj zanesljivo odkrivanje beljakovin Bence Jones je s precipitacijo pri temperaturi 40-60°C. Vendar pa se v urinu, ki je preveč kisel (pH manj kot 3,0) ali preveč alkalen (pH več kot 6,5), z nizko relativno težo urina in nizko koncentracijo Bence Jones beige (manj kot 3 g/L), obori morda ne pride.

Narišite diagram definicije beljakovine

II modul. Samostojno delo z raziskovalno fazo

Metodološke nastavitve:

Naloga št. 1. Študij in si delaj zapiskeprijava št. 1 «

Naloga št. 2.

Pri učitelju pridobite vzorce biološke tekočine (urina), vzorce oštevilčite;

Izvedite test urina z diagnostičnimi testnimi trakovi;

Rezultate zapišite na obrazce za analizo in jih oddajte učitelju.

Priloga št. 1

« Odkrivanje beljakovin z diagnostičnimi testnimi lističi"

Načelo. Beljakovine spremenijo barvo indikatorja na traku. Indikatorji so pakirani v kompletih po 100 trakov, ki so shranjeni v tesno zaprti peresnici na hladnem in suhem mestu.

Pravila za delo z diagnostičnimi testnimi lističi

Pri delu z diagnostičnimi testnimi lističi je treba upoštevati naslednja pravila:

Diagnostične testne trakove hranite v tesno zaprtih posodah;

Shranjujte svinčnike v temnem, suhem in hladnem prostoru pri temperaturi, ki ne presega 30ºС, vendar ne v hladilniku;

Trakov ne izpostavljajte vlagi, neposredni sončni svetlobi, visokim temperaturam ali hlapljivim kemikalijam;

Vzemite le strogo zahtevano število trakov in takoj zaprite peresnico;

Ne dotikajte se diagnostičnih območij s prsti.

Pravila testiranja

1. Za testiranje uporabite jutranji urin, zbran v plastično posodo za urin za enkratno uporabo (ali čisto, suho posodo). Dostavljeni urin premešajte, vendar ga ne centrifugirajte.

IN pozor!

Pri uporabi nestandardnih prilagojenih posod ostanki detergentov v posodi za zbiranje urina povzročijo lažne rezultate.

2. Vzemite testni listič iz peresnice.

3. Etui za svinčnike takoj zaprite s tovarniškim pokrovom in zaščitite trak pred vlago.

4. Območja indikatorskega papirja na traku potopite v testni urin za 2-3 sekunde in ga takoj odstranite.

5. Če želite odstraniti odvečno vlago z diagnostičnih območij traku, povlecite njegov dolg rob vzdolž roba posode (ali druge posode, v kateri se dovaja urin) ali pritrdite ta rob traku na filtrirni papir.

Ne izpirajte odvečnega urina z diagnostičnih področij traku!!!

6. Po preteku časa, navedenega na nalepki peresnika ali v navodilih za posamezen test, primerjajte barvo ustrezne diagnostične cone z barvno lestvico na nalepki peresnika s črtami (standard). Testni postopek je predstavljen na slikah 1-7.

7. Reakcija je ocenjena kot pozitivna ali negativna. Ali izraženo digitalno v g/l. (glej sliko št. 8).

riž. št. 8 Ocena rezultatov študije

III Modul. Testna vprašanja in naloge

Odgovorite na zastavljena vprašanja v svojem delovnem zvezku.

Pojasnite metodo določanja beljakovin v urinu s 50 % dušikovo kislino.

Povejte nam metodo za določanje beljakovin v urinu 20% SSC.

Pojasnite metodo določanja beljakovin v urinu z metodo Robets-Stolnikov-Branberg.

Pojasnite metodo določanja beljakovin v urinu z diagnostičnimi testnimi lističi.

Kakšna so pravila za delo z diagnostičnimi testnimi lističi?

Kateri so glavni kriteriji za pravilno opravljen test?

Opišite metodo za odkrivanje beljakovin Bence Jones v urinu.

Diagnostična vrednost določanja kemičnih lastnosti urina.

Klinična ocena kemijskih lastnosti urina.

Izraze zapišite v delovni zvezek in jih označite , z uporabo preučenega gradiva

Poznavanje teoretičnega in praktičnega gradiva.

Odgovori na varnostna vprašanja.

Spoznajte pogoje.

Literatura za samostojno učenje: I.I.Mironova, L.A.Romanova, V.V.Dolgov. Splošne klinične študije: urin, blato, cerebrospinalna tekočina, ejakulat - M.-Tver: Triada Publishing House LLC, 2005

Hellerjev test[poimenovana po avstrijskem patologu J. F. Hellerju], reakcija za kvalitativno določanje beljakovin v urinu. Temelji na koagulaciji beljakovin pod vplivom kislin. Enako količino filtriranega urina previdno nanesemo na 1-2 ml 50% raztopine dušikove kisline.

Na meji obeh medijev se oblikuje bel obroč (pozitivna reakcija), ki kaže na prisotnost beljakovin v urinu. Obroč se lahko pojavi tudi zaradi nukleoalbuminov ali uratnih soli; v prvem primeru izgine, ko epruveto rahlo stresemo, v drugem pa se obroč nahaja znatno nad mejo medija in izgine, ko se urin segreje. G.p.

vam omogoča odkrivanje beljakovin pri najmanjši koncentraciji v urinu (0,033%).

Prvi poskus

Prvi poskus. Danes mi je en tip rekel: "Boš pa imela kaj povedati svojim vnukom!" Kakšen bedak! Kot da bi imel edine sanje, da bi vnukom na stara leta pripovedoval razne neumnosti o tem, kako sem visel na ograji. M. Bulgakov »Opombe o

PREIZKUS TRDNOSTI

PREIZKUS MOČI Ujetnik Devjatajev je arogantnemu fašistu odgovoril: »Nemčija bo neizogibno poražena!« Pilot takrat še ni vedel, da bo imel izreden sestanek s tistimi, ki so skupaj z von Braunom delali na pošastnem stroju smrti. Širok, neprijeten

PREIZKUS TRDNOSTI

PREIZKUS MOČI Najzgodnejša omemba Menšikova sega v leto 1694: 29. avgusta je car poslal pismo arhangelskemu guvernerju Fjodorju Matvejeviču Apraksinu; Aleksaška Menšikov je bila na seznamu ljudi, ki so naslovniku pošiljali pozdrave. "Alexashka" je omenjena v drugem pismu,

Test moči

Preizkus trdnosti 3. novembra 1992 je bil izveden prvi preizkus trdnosti. Natančneje, Rusi so bili zaradi spodobnosti prisiljeni iti v patruljo na goro. Toda dva dni kasneje je RDO sprožil veliko operacijo za sovražnimi črtami blizu Mount Budkovy Walls.Pet jih je do zob oboroženih odšlo v

Test moči

Preizkus moči, Petrovič nas je veliko naučil. Ne da bi hotel, je hitro napredoval na svojem delovnem mestu in postal generalni svetovalec. Z njegovo pomočjo sem bolje razumel korekcijo zobnikov, rešil pa sem tudi obratne probleme: nameščanje polomljenih zobnikov glede na zobe.

Poglavje 4. Gellerjev učinek

Poglavje 4. Gellerjev učinek Dobro se zavedam, da moje turneje po Evropi ni spremljal potreben znanstveni nadzor, ki bi lahko potrdil hipoteze znanstvenikov o naravi in ​​izvoru energijskih sil, imenovanih »Gellerjev učinek«. In vendar upam, da te

Test moči

Preizkus moči Januar se je bližal koncu, zima pa ni mogla uveljaviti svoje pravice. Zmrzali so se umaknili odmrznitvam. Padel je moker sneg in se takoj stopil. Mračno svinčeno nebo je viselo nad gozdom in vasjo Mosir, kjer smo ostali štiri dni. Veršigora je zamišljen hodil naokoli, vse

"Test vonja"

"Preizkus vonja" Če ste kupec nepremičnine kot jaz, veste, da vedno obstaja skušnjava, da bi vas zanesli teoretični vidiki in se preveč osredotočili na inženirsko plat stvari. Pošljejo ti podatke o poslovni stavbi in ti jih dobiš

Gellerjev fenomen

Gellerjev fenomen V 70. letih 20. stoletja so na Stanfordskem raziskovalnem inštitutu s slavnim jasnovidcem Urijem Gellerjem izvajali znanstvene poskuse, med katerimi je upogibal in lomil kovinske predmete, brisal magnetofone, povzročal izginjanje stvari in

Test moči

Preizkus moči Avgusta 2008 se je napoved šefa Pentagona Roberta Gatesa o morebitnem oboroženem spopadu z Rusijo zdela precej realna. Washington se je ob izkoriščanju Putinovega odstopa s položaja predsednika in vrhovnega poveljnika odločil preizkusiti pripravljenost Moskve

poskusite

Preizkus Preizkus (Probe, essai) in preizkusna dejavnost je naziv za določanje ligatur v plemenitih kovinah in oznake, ki jih posebne nadzorne ustanove naložijo na izdelke iz njih, z namenom, da posameznikom zagotovijo vsebnost plemenitih kovin. določen z zakonom

PREIZKUS TRDNOSTI

PREIZKUS MOČI Ko začnete brati to knjigo, se spomnite, da je tisti, ki vam jo je dal, to storil zato, ker je mislil na vaše dobro počutje in blaginjo, tako kot mi. Vzemite si čas in preučite naš sistem in si vzemite čas da to naredite sklepe, ki temeljijo samo na vaših lastnih

poskusite

Test Začeti morate s testno različico. Zakaj na testu? Ker tudi če si zbral veliko informacij, to še ne pomeni, da si zbral vse potrebne informacije, zato je pogosta napaka, da ljudje takoj začnejo delati nekaj globalno.

Test moči

Preizkus moči V prvih povojnih letih so se mednarodne povezave sovjetskih nogometašev močno razširile. Sedaj je bistveno večje število naših klubov odigralo prijateljske tekme s tujimi ekipami, sicer še ne z najboljšimi, a kljub temu smo na teh srečanjih

http://slovar.wikireading.ru/34558

Vir: http://vekoff.ru/bolezni-i-lechenie/meditsinskie-znaniya/33846-koltsevaya-proba-gellera

Kvalitativno določanje beljakovin v urinu

› Katalog člankov › Klinične študije › Pregled urina

Sestava delovnega mesta za določanje beljakovin v urinu vključuje naslednje elemente:

1. Kemijske epruvete, aglutinacijske epruvete.
2. Set graduiranih pipet.
3. Pipete z ozkim izvlečenim koncem.
4. Alkoholne svetilke ali plinski gorilnik.
5. Črn papir.
6. Ledocetna kislina.
7. Sulfosalicilna kislina.
8. Koncentrirana dušikova kislina.
9. Destilirana voda.

Metode za določanje beljakovin v urinu

Vse metode, ki se uporabljajo za kvalitativno določanje beljakovin v urinu, temeljijo na koagulaciji beljakovin. Koagulacija beljakovin se kaže z različnimi stopnjami motnosti (od opalescence do močne motnosti) ali izgubo kosmičev.

Kakovostno določanje beljakovin v urinu se lahko izvede na enega od naslednjih načinov:

1. vrenje z 10% raztopino ocetne kisline;
2. reakcija z 20% raztopino sulfosalicilne kisline;
3. reakcija s 50% raztopino dušikove kisline (Gellerjev test);
4. reakcija z 1% raztopino dušikove kisline v nasičeni raztopini kuhinjske soli (modificiran Hellerjev test po Larionovi).

Pred kvalitativno določitvijo beljakovin v urinu se izvedejo naslednja pripravljalna dela: 1. Moten urin filtriramo skozi papirnati filter. Če ni mogoče dobiti čistega filtrata, ga ponovno filtriramo skozi isti filter ali urin zmešamo z majhno količino infuzorske zemlje ali smukca, nato pa ga filtriramo.2.

Če je urin alkalen, ga nakisamo z 10% raztopino ocetne kisline do rahlo kisle reakcije pod kontrolo lakmusovega ali univerzalnega indikatorskega papirja.3.

4. Stopnjo motnosti opazujemo na črnem ozadju. Za ozadje je uporabljen črn karton ali črn papir, ki se uporablja pri fotografiji. Upoštevanje reakcije na črnem ozadju vam omogoča, da prepoznate najmanjšo stopnjo motnosti.

Oštevilčene epruvete postavimo v ločeno stojalo. Izvedejo eno od spodaj opisanih reakcij.

1. Preskus z vrenjem z 10 % raztopino ocetne kisline. Za izvedbo tega testa potrebujete 10 % raztopino ocetne kisline, ki jo pripravite na naslednji način: 10 ml ledocetne kisline damo v valj in dolijemo destilirano vodo do oznake 100 ml.

Tehnika določanja beljakovin. V kemično epruveto damo 10-12 ml filtriranega urina rahlo kisle reakcije. Nato zgornji del epruvete z urinom previdno segrejemo do vrenja in vanj dodamo 8-10 kapljic 10% raztopine ocetne kisline.

Epruveto z urinom gledamo na črnem ozadju v prepustni svetlobi. Ob prisotnosti beljakovin v urinu se pojavi motnost različnih stopenj (od opalescence do močne motnosti) ali se pojavijo kosmiči. Spodnji del epruvete, ki ni bil segret, služi kot kontrola.

Ta test zaznava količino beljakovin od 0,015 %o (%o - promil).

2. Reakcija z 20% raztopino sulfosalicilne kisline. 20% raztopino sulfosalicilne kisline pripravimo takole: 20 g sulfosalicilne kisline raztopimo v 70-80 ml destilirane vode, prelijemo v 100 ml valj in dolijemo destilirano vodo do oznake. Pripravljen reagent je shranjen v temni stekleni posodi.

Tehnika določanja beljakovin. 2-3 ml filtriranega urina šibko kisle reakcije damo v dve epruveti enakega premera, v eno od epruvet dodamo 3-4 kapljice 20% raztopine sulfosalicilne kisline, druga epruveta služi kot nadzor.

Če je v epruveti z reagentom beljakovina, se pojavi motnost ali izpadejo kosmiči koaguliranega proteina. V kontrolni cevi ostane tekočina bistra.

Sulfosalicilna kislina skupaj s serumskimi beljakovinami obarja albumoze (peptide), ki so produkt razgradnje beljakovin. Da bi razjasnili vzrok motnega urina, epruveto z urinom segrejemo.

Motnost zaradi tvorbe sirotkinih beljakovin se poveča, medtem ko motnost zaradi prisotnosti albumoze izgine. Ta test ima enako občutljivost kot prejšnji.

3. Reakcija s 50% raztopino dušikove kisline (Gellerjev test). 50% raztopino dušikove kisline pripravimo na naslednji način: 50 ml dušikove kisline s specifično težo 1,2-1,4 dodamo 50 ml destilirane vode (razredčenje 1:1).

Tehnika določanja beljakovin. V ozko majhno epruveto (aglutinacijsko blato) vlijemo 1 ml 50% dušikove kisline. 1 ml filtriranega testnega urina odvzamemo v pipeto z ozkim podaljšanim koncem, nanesemo na reagent in epruveto postavimo v navpičen položaj. Ko je beljakovina prisotna, se na meji tekočine pojavi bel obroč.

Čas pojava obroča in njegove lastnosti so odvisne od količine beljakovin: če je beljakovin malo, se obroč ne pojavi takoj, zato se njegov videz spremlja 2,5-3 minute. Najmanjša količina beljakovin, določena s to metodo, je 0,033°/oo. Z nižjo vsebnostjo beljakovin v urinu se obroč ne oblikuje.

Rezultati reakcije so zabeleženi na črnem ozadju v prepustni svetlobi.

4. Reakcija z 1% raztopino dušikove kisline v nasičeni raztopini kuhinjske soli - modificiran Hellerjev test (po Larionovi).

Za izvedbo testa uporabimo 1% raztopino dušikove kisline, pripravljeno v nasičeni raztopini kuhinjske soli (reagent Larionova).

35 g kuhinjske soli raztopimo v 100 ml destilirane vode, raztopino filtriramo, 99 ml pripravljene nasičene raztopine kuhinjske soli dodamo v 1 ml koncentrirane dušikove kisline s specifično težo 1,2-1,4.

Tehnika določanja beljakovin enako kot pri reakciji s 50% raztopino dušikove kisline (Gellerjev test), le da namesto 1 ml 50% raztopine dušikove kisline v epruveto vlijemo 1 ml Larionovega reagenta in nanj nanesemo 1 ml urina. to. Pojav belega obroča na meji tekočin kaže na prisotnost beljakovin v testiranem urinu. Test Larionove je enako občutljiv kot Hellerjev test.

5. Kolorimetrični (suhi) test za kvalitativno določanje beljakovin. Kolorimetrični (suhi) test za kvalitativno določanje beljakovin v urinu temelji na vplivu beljakovin na barvo indikatorja v pufrski raztopini.

Tehnika določanja beljakovin. Indikatorski papir, namenjen določanju beljakovin, se za kratek čas potopi v urin. Test je pozitiven, če se kos papirja obarva modro-zeleno.

Kvantitativno določanje beljakovin v urinu

Kvantitativno določanje beljakovin v urinu temelji na dejstvu, da ko urin, ki vsebuje beljakovine, prekrijemo s 50% raztopino dušikove kisline ali Larionovega reagenta, se na meji obeh tekočin oblikuje bel obroč, če pa se pojavi prozoren bel obroč, za 3 minute, potem je vsebnost beljakovin 0,033% o ali 33 mg v 1000 ml urina. Pojav obroča prej kot 3 minute kaže na večjo vsebnost beljakovin v urinu.
Pri določanju količine beljakovin v urinu se upoštevajo naslednja pravila:

1. Kvantitativno določanje beljakovin se izvaja samo v tistih delih urina, kjer je bilo kvalitativno odkrito.
2. Določanje se opravi s skrbno filtriranim urinom.
3. Strogo upoštevamo tehniko plastenja testnega urina s 50% raztopino dušikove kisline ali Larionovega reagenta v razmerju reagent/urin (1:1).
4. Čas pojava obroča se določi s štoparico: pri končnem izračunu količine beljakovin se upošteva čas plastenja urina na dušikovi kislini, kar je 15 sekund.
5. Redčenje urina se izvaja na podlagi lastnosti obroča. V tem primeru se vsako naslednje razredčenje urina pripravi iz prejšnjega.
6. Prstani so označeni na črnem ozadju.

Najpogostejši sta dve metodi za kvantitativno določanje beljakovin v urinu: metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg in metoda S. L. Ehrlicha in A. Ya. Althauzena.

1. Roberts-Stolnik-Brandbergova metoda. Po tej metodi se količina beljakovin v urinu določi z redčenjem, dokler se ob naslednjem sloju urina s 50% raztopino dušikove kisline ali reagentom Lariona obroč ne pojavi točno v 3 minutah. Količina beljakovin se izračuna tako, da se 0,033% pomnoži s stopnjo redčenja urina. Dobljeni rezultat izraža količino beljakovin v miligramih na 1000 ml urina, to je v promilih (%o).
2. Metoda S. L. Ehrlicha in A. Ya. Althauzena. V stojalo postavimo vrsto aglutinacijskih epruvet, v katere najprej vlijemo 1 ml 50% raztopine dušikove kisline ali reagenta Larionova. Testni urin se odvzame z ločeno, čisto in suho pipeto z ozkim, izvlečenim koncem in nanese na reagent, nato pa se vključi štoparica. Čas pojava obroča spremljamo tako, da epruveto postavimo na črno podlago. Ko se pojavi prstan, se štoparica izklopi.

Pri plastenju urina se lahko glede na količino beljakovin pojavi kompakten, širok ali nitast obroč. Takoj po nanosu urina na reagent se pojavi kompakten širok obroč. Nitasti obroč se lahko pojavi takoj, preden mine ena minuta, ali v eni do štirih minutah.

Če se v eni do 4 minutah pojavi nitast obroček, urina ni treba redčiti!
Za izračun količine beljakovin v tem primeru je dovolj, da uporabite načrt tabele, ki so ga predlagali avtorji (tabela 1).

Primer 1. Ko je bil urin nanesen na reagent, se je v 2 minutah oblikoval nitast obroč. Če bi se obroč oblikoval do 3 minut, bi bila količina beljakovin 0,033 %.

V tem primeru je obroč nastal prej. Ustrezni popravek glede na tabelo načrta za čas 2 minut je enak 1+1/8. To pomeni, da bo beljakovin v določenem delu urina 1+1/8-krat več kot 0,033°/oo, tj. 0,033%o X(1+1/8) = 0,037°/oo.

Ko se v 1 minuti, to je po 40-60 sekundah, pojavi nitast obroč, naredite eno 1,5-kratno razredčitev urina (2 dela urina + 1 del vode), nato pa razredčeni urin ponovno nanesite na reagent in zabeležite videz prstana. Pri izračunu rezultatov se upošteva, da je bil urin razredčen 1,5-krat.

Primer 2. Po plastenju urina, razredčenega 1,5-krat, se je v 2 minutah pojavil nitast obroč. Če bi se obroč pojavil pri 3 minutah, bi bila beljakovina 0,033 %. Ustrezna sprememba po načrtu za čas 2 minuti je 1+1/8. Beljakovine v urinu vsebujejo 0,033%oX1,5X(1+1/8) = 0,056%o.

Če se takoj pojavi nitast obroč, se urin razredči 2-krat (1 del urina + 1 del vode). Razredčen urin se ponovno nanese na reagent in po 1 minuti opazimo pojav obroča.

Primer 3. Pri nanosu 2-krat razredčenega urina na reagent se je po 1 minuti in 15 sekundah pojavil nitast obroč. Potem bo količina beljakovin v proučevanem urinu po analogiji s prejšnjimi izračuni enaka 0,033% oХ2Х(1+3/8) = 0,091%.V primeru širokega obroča se urin razredči 4-krat ( 1 del urina + 3 dele vode).

Z naknadnim nanosom razredčenega urina se lahko pred ali po eni minuti oblikuje nitast obroč. V takih primerih se količina beljakovin izračuna po analogiji s prejšnjimi primeri, tj. 0,033 % o pomnožimo s stopnjo razredčitve in ustreznim popravkom.

Primer 1. Po 4-kratnem redčenju urina se je prstan pojavil takoj. Urin se razredči 2-krat. Po nanosu 8-krat razredčenega urina (4X2) se je v 1,5 minutah oblikoval nitast obroč.

V tem primeru je količina beljakovin 0,033%oX8X1,25 = 0,33%o itd.
Ko se pojavi kompakten obroč, se urin razredči 8-krat (1 del urina + 7 delov vode).

Ko se razredčeni urin naknadno nanese na reagent, se lahko oblikuje kompakten, širok ali nitast obroč.

Primer 2. Ko je urin nanesel na dušikovo kislino, je takoj nastal kompakten obroč. Urin razredčimo 8-krat (1 del urina + 7 delov vode) in ponovno razporedimo po plasteh. To je spet ustvarilo kompakten prstan.

Nato se urin razredči še 8-krat (v ta namen vzemite 1 del razredčenega urina v valj ali epruveto in mu dodajte 7 delov vode). Po ponovnem nanosu razredčenega urina se je takoj oblikoval nitast obroč. Urin razredčimo 2-krat (1 del urina + 1 del vode).

Po ponovnem nanosu razredčenega urina se je v 2 minutah oblikoval nitast obroč. Količina beljakovin v danem delu urina se izračuna na naslednji način: 0,033.%oX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%o.

Poleg planske tabele je tabela z izračunanimi vrednostmi beljakovin (tabela 2). Če urin ni razredčen, je količina beljakovin navedena v stolpcu "Cel, nerazredčen urin". Pri redčenju urina za celo število krat (8,4,2) uporabite tabelo. 1. Pri redčenju urina 1,5-krat uporabite tabelo. 2.

Tehnika uporabe tabele za določanje vsebnosti beljakovin v urinu

V ustreznih stolpcih tabele navedite čas pojava obroča in stopnjo redčenja urina.
Številka, ki se nahaja na presečišču vodoravne in navpične črte, potegnjene iz teh dveh indikatorjev, označuje količino beljakovin v testiranem urinu (%o).

Možno je, da pri pozitivnem kvalitativnem testu za beljakovine ne nastane obroč, ko se nanese 50 % raztopina dušikove kisline. To pomeni, da je v urinu manj kot 0,033 % beljakovin. V takih primerih je količina beljakovin v obrazcu za analizo označena z izrazom "sledi".

Če je beljakovina kvantificirana, se vsebnost beljakovin v promilu zabeleži na obrazcu za analizo urina, na primer "beljakovine - 0,66% o."

Poleg kvantitativnega določanja beljakovin v ločenem delu urina se izračuna njegova dnevna količina v gramih. V ta namen odvzamemo dnevni urin, izmerimo njegovo količino in določimo vsebnost beljakovin v promilih. Nato se izvede izračun. Na primer, dnevna količina urina je 1800 ml, beljakovine so 7 ° / oo. To pomeni, da dnevna količina urina vsebuje beljakovine: 1,8X7 = 12,6 g.

Vzorec ima občutljivost 0,033 g/l in se uporablja pri klinični diagnozi proteinurije. Načelo detekcije proteina temelji na njegovi denaturaciji pod vplivom denaturirajočega faktorja - koncentrirane dušikove kisline ali Larionovega reagenta.

Treba je opozoriti, da je določena količina beljakovin vedno prisotna v urinu, vendar je praviloma njegova koncentracija v urinu zdrave osebe pod pragom občutljivosti kvalitativne reakcije in se ne zazna s preprostimi metodami. Vzorec ni primeren za količine beljakovin nad 0,033 g/l. Pri višjih koncentracijah je treba urin razredčiti ali uporabiti albuminometer Esbach.

Za določitev količine skupnih beljakovin v urinu se uporablja metoda, ki temelji na Hellerjevem testu - metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov (W. Roberts, 1830-1899, angleški terapevt). Tehnika vključuje redčenje urina na spodnjo mejo občutljivosti vzorca (0,033 g/l) in čas tvorbe obroča 2-3 minute.

Napredek analize

Reagenti: koncentrirana (dimeča) dušikova kislina ali Larionov reagent. Testirani urin mora biti čist in kisel.

Priprava Larionovega reagenta

Pripravimo nasičeno raztopino natrijevega klorida (20-30 g soli raztopimo v 100 ml tople vode, pustimo stati, dokler se ne ohladi). Supernatant se odlije in filtrira. 99 ml filtrata dodamo 1 ml koncentrirane dušikove kisline (2 ml klorovodikove kisline lahko nadomestimo).

Raziskovalna tehnika

Približno enako količino urina previdno nanesemo vzdolž stene v epruveto z 1-2 ml reagenta. V prisotnosti beljakovin se po približno 2-3 minutah na meji med tekočinama opazi motnost - bel obroč denaturirane beljakovine.

Pri uporabi dušikove kisline se lahko pojavi lažno pozitiven rezultat zaradi visoke koncentracije nukleoalbumina ali uratnih soli. V prvem primeru izgine, ko epruveto rahlo zazibamo, v drugem pa se obroč nahaja precej nad vmesnikom med mediji in izgine, ko se segreje; pri ponovitvi testa z razredčenim urinom se obroč ne oblikuje. Včasih se pojavi rjavkast pigmentni obroč tudi zaradi oksidacije urokroma z dušikovo kislino.

Uporaba reagenta Larionova ima v nasprotju z dušikovo kislino številne prednosti: na meji plasti se ne tvorijo pigmentni obroči, pozitiven rezultat pa daje jasnejše beljakovinske obroče.

Poglej tudi

Napišite oceno o članku "Gellerjev test"

Povezave

Literatura

Odlomek, ki opisuje Gellerjev test

Hellerjev test, poimenovano po avst patolog I. F. Heller, skupno ime za kvalitativno reakcijo na beljakovine v urinu. Vzorec ima občutljivost 0,033 g/l in se uporablja pri klinični diagnozi proteinurije. Načelo detekcije proteina temelji na njegovi denaturaciji pod vplivom denaturirajočega faktorja - koncentrirane dušikove kisline ali Larionovega reagenta.

Treba je opozoriti, da je določena količina beljakovin vedno prisotna v urinu, vendar je praviloma njegova koncentracija v urinu zdrave osebe pod pragom občutljivosti kvalitativne reakcije in se ne zazna s preprostimi metodami. Vzorec ni primeren za količine beljakovin nad 0,033 g/l. Pri višjih koncentracijah je treba urin razredčiti ali uporabiti albuminometer Esbach.

Za določitev količine skupnih beljakovin v urinu se uporablja metoda, ki temelji na Hellerjevem testu - metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov (W. Roberts, 1830-1899, angleški terapevt). Tehnika vključuje redčenje urina na spodnjo mejo občutljivosti vzorca (0,033 g/l) in čas tvorbe obroča 2-3 minute.

Napredek analize

Reagenti: koncentrirana (dimeča) dušikova kislina ali Larionov reagent. Testirani urin mora biti čist in kisel.

Priprava Larionovega reagenta

Pripravimo nasičeno raztopino natrijevega klorida (20-30 g soli raztopimo v 100 ml tople vode, pustimo stati, dokler se ne ohladi). Supernatant se odlije in filtrira. 99 ml filtrata dodamo 1 ml koncentrirane dušikove kisline (2 ml klorovodikove kisline lahko nadomestimo).

Raziskovalna tehnika

Približno enako količino urina previdno nanesemo vzdolž stene v epruveto z 1-2 ml reagenta. V prisotnosti beljakovin se po približno 2-3 minutah na meji med tekočinama opazi motnost - bel obroč denaturirane beljakovine.

Pri uporabi dušikove kisline se lahko pojavi lažno pozitiven rezultat zaradi visoke koncentracije nukleoalbumina ali uratnih soli. V prvem primeru izgine, ko epruveto rahlo zazibamo, v drugem pa se obroč nahaja precej nad vmesnikom med mediji in izgine, ko se segreje; pri ponovitvi testa z razredčenim urinom se obroč ne oblikuje. Včasih se pojavi rjavkast pigmentni obroč tudi zaradi oksidacije urokroma z dušikovo kislino.

Sestava delovnega mesta za določanje beljakovin v urinu vključuje naslednje elemente:

1. Kemijske epruvete, aglutinacijske epruvete.
2. Set graduiranih pipet.
3. Pipete z ozkim izvlečenim koncem.
4. Alkoholne svetilke ali plinski gorilnik.
5. Črn papir.
6. Ledocetna kislina.
7. Sulfosalicilna kislina.
8. Koncentrirana dušikova kislina.
9. Destilirana voda.

Metode za določanje beljakovin v urinu

Vse metode, ki se uporabljajo za kvalitativno določanje beljakovin v urinu, temeljijo na koagulaciji beljakovin. Koagulacija beljakovin se kaže z različnimi stopnjami motnosti (od opalescence do močne motnosti) ali izgubo kosmičev.

Kakovostno določanje beljakovin v urinu se lahko izvede na enega od naslednjih načinov:

1. vrenje z 10% raztopino ocetne kisline;
2. reakcija z 20% raztopino sulfosalicilne kisline;
3. reakcija s 50% raztopino dušikove kisline (Gellerjev test);
4. reakcija z 1% raztopino dušikove kisline v nasičeni raztopini kuhinjske soli (modificiran Hellerjev test po Larionovi).

Pred kvalitativno določitvijo beljakovin v urinu se izvedejo naslednja pripravljalna dela:
1. Moten urin filtriramo skozi papirnati filter. Če ni mogoče dobiti čistega filtrata, ga ponovno filtrirajte skozi isti filter ali urin zmešajte z majhno količino infuzorske zemlje ali smukca, nato pa ga filtrirajte.
2. Če je urin alkalen, ga nakisamo z 10% raztopino ocetne kisline do rahlo kisle reakcije pod kontrolo lakmusovega ali univerzalnega indikatorskega papirja.
3. Z nizko vsebnostjo soli (svetlo rumen ali bledo rumen urin z nizko specifično težo) za vsakega
V vzorec dodajte nekaj kapljic nasičene raztopine kuhinjske soli, saj pomanjkanje soli povzroči koagulacijo beljakovin.
4. Stopnjo motnosti opazujemo na črnem ozadju. Za ozadje je uporabljen črn karton ali črn papir, ki se uporablja pri fotografiji. Upoštevanje reakcije na črnem ozadju vam omogoča, da prepoznate najmanjšo stopnjo motnosti.

Oštevilčene epruvete postavimo v ločeno stojalo. Izvedejo eno od spodaj opisanih reakcij.

1. Preskus z vrenjem z 10 % raztopino ocetne kisline. Za izvedbo tega testa potrebujete 10 % raztopino ocetne kisline, ki jo pripravite na naslednji način: 10 ml ledocetne kisline damo v valj in dolijemo destilirano vodo do oznake 100 ml.

Tehnika določanja beljakovin. V kemično epruveto damo 10-12 ml filtriranega urina rahlo kisle reakcije. Nato zgornji del epruvete z urinom previdno segrejemo do vrenja in vanj dodamo 8-10 kapljic 10% raztopine ocetne kisline. Epruveto z urinom gledamo na črnem ozadju v prepustni svetlobi. Ob prisotnosti beljakovin v urinu se pojavi motnost različnih stopenj (od opalescence do močne motnosti) ali se pojavijo kosmiči. Spodnji del epruvete, ki ni bil segret, služi kot kontrola. Ta test zaznava količino beljakovin od 0,015 %o (%o - promil).

2. Reakcija z 20% raztopino sulfosalicilne kisline. 20% raztopino sulfosalicilne kisline pripravimo takole: 20 g sulfosalicilne kisline raztopimo v 70-80 ml destilirane vode, prelijemo v 100 ml valj in dolijemo destilirano vodo do oznake. Pripravljen reagent je shranjen v temni stekleni posodi.

Tehnika določanja beljakovin. 2-3 ml filtriranega urina šibko kisle reakcije damo v dve epruveti enakega premera, v eno od epruvet dodamo 3-4 kapljice 20% raztopine sulfosalicilne kisline, druga epruveta služi kot nadzor. Če je v epruveti z reagentom beljakovina, se pojavi motnost ali izpadejo kosmiči koaguliranega proteina. V kontrolni cevi ostane tekočina bistra. Sulfosalicilna kislina skupaj s serumskimi beljakovinami obarja albumoze (peptide), ki so produkt razgradnje beljakovin. Da bi razjasnili vzrok motnega urina, epruveto z urinom segrejemo. Motnost zaradi tvorbe sirotkinih beljakovin se poveča, medtem ko motnost zaradi prisotnosti albumoze izgine. Ta test ima enako občutljivost kot prejšnji.

3. Reakcija s 50% raztopino dušikove kisline (Gellerjev test). 50% raztopino dušikove kisline pripravimo na naslednji način: 50 ml dušikove kisline s specifično težo 1,2-1,4 dodamo 50 ml destilirane vode (razredčenje 1:1).

Tehnika določanja beljakovin. V ozko majhno epruveto (aglutinacijsko blato) vlijemo 1 ml 50% dušikove kisline. 1 ml filtriranega testnega urina odvzamemo v pipeto z ozkim podaljšanim koncem, nanesemo na reagent in epruveto postavimo v navpičen položaj. Ko je beljakovina prisotna, se na meji tekočine pojavi bel obroč. Čas pojava obroča in njegove lastnosti so odvisne od količine beljakovin: če je beljakovin malo, se obroč ne pojavi takoj, zato se njegov videz spremlja 2,5-3 minute. Najmanjša količina beljakovin, določena s to metodo, je 0,033°/oo. Z nižjo vsebnostjo beljakovin v urinu se obroč ne oblikuje. Rezultati reakcije so zabeleženi na črnem ozadju v prepustni svetlobi.

4. Reakcija z 1% raztopino dušikove kisline v nasičeni raztopini kuhinjske soli - modificiran Hellerjev test (po Larionovi). Za izvedbo testa uporabimo 1% raztopino dušikove kisline, pripravljeno v nasičeni raztopini kuhinjske soli (reagent Larionova). 35 g kuhinjske soli raztopimo v 100 ml destilirane vode, raztopino filtriramo, 99 ml pripravljene nasičene raztopine kuhinjske soli dodamo v 1 ml koncentrirane dušikove kisline s specifično težo 1,2-1,4.

Tehnika določanja beljakovin enako kot pri reakciji s 50% raztopino dušikove kisline (Gellerjev test), le da namesto 1 ml 50% raztopine dušikove kisline v epruveto vlijemo 1 ml Larionovega reagenta in nanj nanesemo 1 ml urina. to. Pojav belega obroča na meji tekočin kaže na prisotnost beljakovin v testiranem urinu. Test Larionove je enako občutljiv kot Hellerjev test.

5. Kolorimetrični (suhi) test za kvalitativno določanje beljakovin. Kolorimetrični (suhi) test za kvalitativno določanje beljakovin v urinu temelji na vplivu beljakovin na barvo indikatorja v pufrski raztopini.

Tehnika določanja beljakovin. Indikatorski papir, namenjen določanju beljakovin, se za kratek čas potopi v urin. Test je pozitiven, če se kos papirja obarva modro-zeleno.

Kvantitativno določanje beljakovin v urinu

Kvantitativno določanje beljakovin v urinu temelji na dejstvu, da ko urin, ki vsebuje beljakovine, prekrijemo s 50% raztopino dušikove kisline ali Larionovega reagenta, se na meji obeh tekočin oblikuje bel obroč, če pa se pojavi prozoren bel obroč, za 3 minute, potem je vsebnost beljakovin 0,033% o ali 33 mg v 1000 ml urina. Pojav obroča prej kot 3 minute kaže na večjo vsebnost beljakovin v urinu.
Pri določanju količine beljakovin v urinu se upoštevajo naslednja pravila:

1. Kvantitativno določanje beljakovin se izvaja samo v tistih delih urina, kjer je bilo kvalitativno odkrito.
2. Določanje se opravi s skrbno filtriranim urinom.
3. Strogo upoštevamo tehniko plastenja testnega urina s 50% raztopino dušikove kisline ali Larionovega reagenta v razmerju reagent/urin (1:1).
4. Čas pojava obroča se določi s štoparico: pri končnem izračunu količine beljakovin se upošteva čas plastenja urina na dušikovi kislini, kar je 15 sekund.
5. Redčenje urina se izvaja na podlagi lastnosti obroča. V tem primeru se vsako naslednje razredčenje urina pripravi iz prejšnjega.
6. Prstani so označeni na črnem ozadju.

Najpogostejši sta dve metodi za kvantitativno določanje beljakovin v urinu: metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg in metoda S. L. Ehrlicha in A. Ya. Althauzena.

1. Roberts-Stolnik-Brandbergova metoda. Po tej metodi se količina beljakovin v urinu določi z redčenjem, dokler se ob naslednjem sloju urina s 50% raztopino dušikove kisline ali reagentom Lariona obroč ne pojavi točno v 3 minutah. Količina beljakovin se izračuna tako, da se 0,033% pomnoži s stopnjo redčenja urina. Dobljeni rezultat izraža količino beljakovin v miligramih na 1000 ml urina, to je v promilih (%o).
2. Metoda S. L. Ehrlicha in A. Ya. Althauzena. V stojalo postavimo vrsto aglutinacijskih epruvet, v katere najprej vlijemo 1 ml 50% raztopine dušikove kisline ali reagenta Larionova. Testni urin se odvzame z ločeno, čisto in suho pipeto z ozkim, izvlečenim koncem in nanese na reagent, nato pa se vključi štoparica. Čas pojava obroča spremljamo tako, da epruveto postavimo na črno podlago. Ko se pojavi prstan, se štoparica izklopi.

Pri plastenju urina se lahko glede na količino beljakovin pojavi kompakten, širok ali nitast obroč. Takoj po nanosu urina na reagent se pojavi kompakten širok obroč. Nitasti obroč se lahko pojavi takoj, preden mine ena minuta, ali v eni do štirih minutah.

Če se v eni do 4 minutah pojavi nitast obroček, urina ni treba redčiti!
Za izračun količine beljakovin v tem primeru je dovolj, da uporabite načrt tabele, ki so ga predlagali avtorji (tabela 1).

Primer 1. Ko je bil urin nanesen na reagent, se je v 2 minutah oblikoval nitast obroč. Če bi se obroč oblikoval do 3 minut, bi bila količina beljakovin 0,033 %.

V tem primeru je obroč nastal prej. Ustrezni popravek glede na tabelo načrta za čas 2 minut je enak 1+1/8. To pomeni, da bo beljakovin v določenem delu urina 1+1/8-krat več kot 0,033°/oo, tj. 0,033%o X(1+1/8) = 0,037°/oo.

Ko se v 1 minuti, to je po 40-60 sekundah, pojavi nitast obroč, naredite eno 1,5-kratno razredčitev urina (2 dela urina + 1 del vode), nato pa razredčeni urin ponovno nanesite na reagent in zabeležite videz prstana. Pri izračunu rezultatov se upošteva, da je bil urin razredčen 1,5-krat.

Primer 2. Po nanosu 1,5-krat razredčenega urina se je v 2 minutah pojavil nitast obroč. Če bi se obroč pojavil pri 3 minutah, bi bila beljakovina 0,033 %. Ustrezna sprememba po načrtu za čas 2 minuti je 1+1/8. Beljakovine v urinu vsebujejo 0,033%oX1,5X(1+1/8) = 0,056%o.

Če se takoj pojavi nitast obroč, se urin razredči 2-krat (1 del urina + 1 del vode). Razredčen urin se ponovno nanese na reagent in po 1 minuti opazimo pojav obroča.

Primer 3. Pri nanosu 2-krat razredčenega urina na reagent se je po 1 minuti in 15 sekundah pojavil nitast obroč. Potem bo količina beljakovin v testiranem urinu, po analogiji s prejšnjimi izračuni, enaka
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
Če se pojavi širok obroč, se urin razredči 4-krat (1 del urina + 3 dele vode).
Z naknadnim nanosom razredčenega urina se lahko pred ali po eni minuti oblikuje nitast obroč. V takih primerih se količina beljakovin izračuna po analogiji s prejšnjimi primeri, tj. 0,033 % o pomnožimo s stopnjo razredčitve in ustreznim popravkom.

Primer 1. Po 4-kratnem redčenju urina se je prstan pojavil takoj. Urin se razredči 2-krat. Po nanosu 8-krat razredčenega urina (4X2) se je v 1,5 minutah oblikoval nitast obroč. V tem primeru je količina beljakovin 0,033%oX8X1,25 = 0,33%o itd.
Ko se pojavi kompakten obroč, se urin razredči 8-krat (1 del urina + 7 delov vode). Ko se razredčeni urin naknadno nanese na reagent, se lahko oblikuje kompakten, širok ali nitast obroč.

Primer 2. Ko je urin nanesel na dušikovo kislino, je takoj nastal kompakten obroč. Urin razredčimo 8-krat (1 del urina + 7 delov vode) in ponovno razporedimo po plasteh. To je spet ustvarilo kompakten prstan. Nato se urin razredči še 8-krat (v ta namen vzemite 1 del razredčenega urina v valj ali epruveto in mu dodajte 7 delov vode). Po ponovnem nanosu razredčenega urina se je takoj oblikoval nitast obroč. Urin razredčimo 2-krat (1 del urina + 1 del vode). Po ponovnem nanosu razredčenega urina se je v 2 minutah oblikoval nitast obroč. Količina beljakovin v danem delu urina se izračuna na naslednji način: 0,033.%oX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%o.

Poleg planske tabele je tabela z izračunanimi vrednostmi beljakovin (tabela 2). Če urin ni razredčen, je količina beljakovin navedena v stolpcu "Cel, nerazredčen urin". Pri redčenju urina za celo število krat (8,4,2) uporabite tabelo. 1. Pri redčenju urina 1,5-krat uporabite tabelo. 2.

Tehnika uporabe tabele za določanje vsebnosti beljakovin v urinu

V ustreznih stolpcih tabele navedite čas pojava obroča in stopnjo redčenja urina.
Številka, ki se nahaja na presečišču vodoravne in navpične črte, potegnjene iz teh dveh indikatorjev, označuje količino beljakovin v testiranem urinu (%o).

Možno je, da pri pozitivnem kvalitativnem testu za beljakovine ne nastane obroč, ko se nanese 50 % raztopina dušikove kisline. To pomeni, da je v urinu manj kot 0,033 % beljakovin. V takih primerih je količina beljakovin v obrazcu za analizo označena z izrazom "sledi".

Če je beljakovina kvantificirana, se vsebnost beljakovin v promilu zabeleži na obrazcu za analizo urina, na primer "beljakovine - 0,66% o."

Poleg kvantitativnega določanja beljakovin v ločenem delu urina se izračuna njegova dnevna količina v gramih. V ta namen odvzamemo dnevni urin, izmerimo njegovo količino in določimo vsebnost beljakovin v promilih. Nato se izvede izračun. Na primer, dnevna količina urina je 1800 ml, beljakovine so 7 ° / oo. To pomeni, da dnevna količina urina vsebuje beljakovine: 1,8X7 = 12,6 g.